2015年10月9日 星期五

生物膜如何形成?

游朝慶
   形成生物膜可以區分為幾個步驟11,12,第一步是附著(Attachment),指的是微生物在無機或有機物表面上的黏附,成為接下來增殖的基礎(niche)。尤其處在固體-液體介面的交接處(例如水或血)更是適當的附著處。通常比較粗糙的表面、厭水的材質、增加流速(剪力上升)、適宜的溫度及附近營養來源充足會促使附著機會增加,起初,這種附著是可逆的reversible,或祇是對生物無害的contamination。(圖113)我們以往常誤認為微生物是單獨行動且自由浮動的,我們稱此自由營生的個體為浮游狀態 (planktonic form),然而自然狀態下,微生物往往傾向於附著,以便形成生物膜14,15
   附著之後第二步便是集結,建立微生物社群 (colonisationy),細菌接著會不斷地增殖,或呼朋引伴,吸引同伴或聯軍,形成更穩固永久的附著(permanent attachment),這種群聚生長的狀態稱為固著狀態 (sessile form),此時重要的是個體間的黏著和累積(accumulation),分化(differentiate)、彼此交換基因以增加存活率15,16。像這樣細胞與細胞間的訊息溝通在細菌學上稱為「群聚感應」(quorum sensing)17,18。「quorum」指會議的法定人數,「quorum sensing」即是感應達到法定人數與否。有些細菌可能潛藏體內,等待有足夠同伴才向寄主發難,一舉克敵制勝。但細菌是怎麼感應的呢?他又不會說話,難道他是『來自星星的你』,有心電感應?想太多了,其實同種細菌彼此間會發出一種味道(可擴散訊息分子),等味道的濃度到了,就彼此知道軍隊已集結完畢,準備戰鬥合體神寵變身。而對於不同種細菌的聯軍,也能發出另一種共通的味道,以準備協同作戰。
   第三步,當細菌的族群密度已達到最低門檻,藉由「群聚感應」這道密令,細菌們開始集體分泌蛋白質、多醣體,醣脂質(glycolipid),並促使某些細菌死亡並釋放eDNA6,15,19 (這些都被稱為細胞外聚合體(extracellular polymeric substance,EPS),這EPS有時也被稱為史萊姆slime),其中被釋放出的細菌DNA被認為是提供生物膜EPS基質的重要元素20,但怎麼可能會有烈士願意被犧牲呢,難道是為了召喚混沌黑魔術師,而將黑魔導做祭品),並形成3D的立體結構,外表則會包覆著具黏性(slime)的Polysaccharide多醣體,形成一穩定的碉堡結構,於是成熟的細菌生物膜社區就形成了(biofilm development)。
   最後(第四步)因應環境改變或特定原因下微生物群體破體而出 (spreading, dispersal)21,22,再度成為單一自由營生的個體(planktonic bacteria)尋找下一個附著的目標,而成熟的生物膜將會持續地釋放細菌或生物膜碎片,如此周而復始為生物膜的一個週期,終究造成宿主的全身感染systemic infection。

圖1、多種細菌生物膜的形成過程13,分為四步驟,附著、群聚集結、生物膜形成、及擴散
11. Donlan RM: Biofilms: microbial life on surfaces. Emerg Infect Dis 2002;8:881-90.
12. Fux CA, Costerton JW, Stewart PS, et al: Survival strategies of infectious biofilms. Trends Microbiol 2005;13:34-40.
13. Phillips P, Sampson E, Yang Q, et al. Bacterial biofilms in wounds. Wound Healing Southern Africa 2008; 1(2): 10-12
14. Stoodley P, Sauer K, Davies DG, Costerton JW. Biofilms as complex differentiated communities. Annu Rev Microbiol 2002; 56: 187-209.
15. Flemming HC, Neu TR, Wozniak DJ. The EPS matrix: the “house of biofilm cells”. J Bacteriol 2007; 189(22): 7945-47
16.Donlan RM, Costerton JW. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clin Microbiol Rev 2002; 15(2): 167-93
17. Horswill AR, Stoodley P, Stewart PS, Parsek MR. The effect of the chemical, biological, and physical environment on quorum sensing in structured microbial communities. Anal Bioanal Chem 2007; 387(2): 371-80.
18. 關於 quorum sensing 的 TED Talk:Bonnie Bassler: The secret, social lives of bacteria, https://www.youtube.com/watch?v=TVfmUfr8VPA
19. Sutherland I. Biofilm exopolysaccharides: a strong and sticky framework. Microbiology 2001; 147(Pt 1): 3-9.
20.Rice KC, Mann EE, Endres JL, et al. The cidA murein hydrolase regulator contributes to DNA release and biofilm development in Staphylococcus aureus. Proc Natl Acad Sci USA 2007; 104(19): 8113-18
21. Boles BR, Horswill AR: Agr-mediated dispersal of Staphylococcus aureus biofilms. PLoS Pathol 2008;4:e1000052.
22. Kaplan JB: Biofilm dispersal: mechanisms, clinical implications, and potential therapeutic uses. J Dent Res 2010;89:205-18.

2015年10月5日 星期一

細菌生物膜Biofilm

游朝慶
   關於生物膜(Biofilm,又稱細菌生物膜、生物薄膜、菌膜、在大陸較常被稱為生物被膜(而『生物膜』在大陸被認為是biological membrane),日文叫バイオフィルム)的錯誤觀念很多,如可不可以肉眼看見生物膜?傷口中的slough是不是biofilm?由於資料太多,以下我以”wounds international”雜誌於2010年出刊的” Biofilm Made Easy1”為主要架構,並旁徵谷歌大神的一些資料,向大家介紹什麼是生物膜。

什麼是生物膜(Biofilm)?
   生物膜是微生物藉著附著而固定於某特定載體上的微生物共生體。它的結構複雜且同時受細菌自身分泌的聚多醣類黏液膜保護。在水中環境下,幾乎任何物體表面上都能夠形成生物膜2。生物膜(biofilm)的主成分為由細菌DNA、多醣體及蛋白質組成的細胞外聚合體(extracellular polymeric substance,EPS)。生物膜的形成有兩項因素:有固定營養的水性環境及一個可供細菌黏附的表面。生物膜廣泛的定義:就是由微生物以及其所分泌之胞外物質(extracellular matrix)附著在物體表面所形成的結構。根據研究發現:環境中的微生物,並非如我們想像的都是離群索居,就如同人類會群居一般,百分之九十以上的微生物,都是群聚生長在生物膜的結構中。不僅如此,一部分居住在生物膜社區中的細菌,還必須自我犧牲和裂解,以釋放出細菌細胞中的染色體DNA,稱之為胞外DNA(extracellular DNA,eDNA),以供形成生物膜所需。由此可知:細菌形成生物膜是細菌的集體行為,彼此之間需互相協調溝通的3

生物膜和傷口的關係?

   長久以來已經知道,生物膜容易在一些醫療裝置上形成,如導尿管foley、氣管內管、骨科及乳房的一些人工植入物、隱形眼鏡、子宮內避孕器IUD、中心靜脈導管CVC、以及縫線4,5。這些常導致一些不容易治療的細菌感染或慢性發炎,如感染性心內膜炎、導管相關的血流或泌尿道感染、人工植入物的感染、牙周病、尿路結石感染、及骨髓炎4,6-9。生物膜也在傷口中被發現,並且和不易癒合的傷口有關,在電子顯微鏡下發現慢性傷口中,有60%存在生物膜,相對在急性傷口中只有6%發現有生物膜10。(未完)
1.Phillips PL, Wolcott RD, Fletcher J, Schultz GS,Biofilm Made Easy. Wounds International, 1(3): 1-6,. 2010, http://www.woundsinternational.com/media/issues/288/files/content_8851.pdf
2.生物膜-透析水質的隱形殺手-安愼診所 溫玉嬌 主任,http://www.hcrsfvac.artcom.tw/ap/news_view.aspx?bid=40&sn=d39d2cbf-7cab-4f45-bdf7-62a3132c3e1d
3.細菌生物膜與人類感染疾病,生技系 林美惠助理教授,長庚校訊第129期,http://memo.cgu.edu.tw/Secretariat/news/129/research/research_1.htm
4. Costerton JW, Stewart PS, Greenberg EP. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections. Science 1999; 284(5418): 1318-22. 6. Donlan RM, 5.Costerton JW. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clin Microbiol Rev 2002; 15(2): 167-93.
6.Hall-Stoodley L, Stoodley P. Evolving concepts in biofilm infections. Cell Microbiol 2009; 11(7): 1034-43.
7. Wolcott RD, Rhoads DD, Bennett ME, et al. Chronic wounds and the medical biofilm paradigm. J Wound Care 2010; 19(2): 45-50, 52-53.
8. Parsek MR, Singh PK: Bacterial biofilms: an emerging link to disease pathogenesis. Annu Rev Microbiol 2003;57:677-701.
9. Lindsay D, von HA: Bacterial biofilms within the clinical setting: what healthcare professionals should know. J Hosp Infect 2006;64:313-25.
10.James GA, Swogger E, Wolcott R, et al. Biofilms in chronic wounds. Wound Repair Regen 2008;16(1): 37-44.